Kvin forto:
● Instrumento agordita kun la eltiro kaj purigita paŝo de nuklea acido
● Instrumento agordita kun ultrasona eltira modulo
● Instrumento agordita kun plene aŭtomata
● Instrumento agordita kun varia temperaturo-amplifiko
● Instrumento agordita kun plene enfermita reakciilo
1.Ĉu nukleaj acidaj detektaj reakciiloj devas esti ĉerpitaj kaj purigitaj?
La principo de nuklea acida detekto estas jena:sub la ago de enkonduko, DNA-polimerazo estas uzata por fari ĉenreagan plifortigon sur ŝablono DNA/RNA (postulante inversan transskribon de NA), kaj tiam la kvanto de fluoreska signalo liberigita estas detektita por determini ĉu la provaĵo enhavas la nuklean acidon (DNA/RNA) de la detekta patogeno.
1) Provaĵoj kiuj ne estis ĉerpitaj aŭ purigitaj povas enhavi multajn komponentojn kiuj influas la finan rezulton: nukleazo (kiu povas solvi la celan nuklean acidon kaj kaŭzi falsan negativon), proteazon (kiu povas redukti DNA-polimerazon kaj kaŭzi falsan negativon), peza metalo. salo (kiu kondukas al la malaktivigo de sintazo kaj kaŭzas falsan pozitivon ), tro acida aŭ tro alkala PH (kiu povas kaŭzi la reagon malsukcesi), Nekompleta RNA (kaŭzante malveran negativan inversan transskriban malsukceson).
2) Kelkaj specimenoj malfacilas rekte pligrandigi: Gram-pozitivajn kaj iujn parazitojn, pro siaj dikaj ĉelaj muroj kaj aliaj strukturoj, se ili ne trapasas la nukleacidan ekstraktan kaj purigan procezon, la senekstrakta ilaro povas malsukcesi por tiaj. specimenoj.
Tial oni rekomendas elekti la testan ilaron aŭ instrumenton agordita kun la eltira paŝo de nuklea acido.
2. Kemia eltiro aŭ fizika ultrasona fragmentiĝo eltiro?
Ĝenerale, kemia eltiro povas esti aplikita al la plej granda parto de la antaŭtraktado kaj Purigado.Tamen, en dikmuraj Gram-pozitivaj bakterioj kaj kelkaj parazitoj, estas ankaŭ la kazo ke kemia ekstraktado ne povas akiri efikajn nukleajn acidŝablonojn, rezultigante falsan negativan detekton.Krome, kemia eltiro ofte uzas fortajn agentojn, se la eluo ne estas ĝisfunda, estas facile enkonduki fortan alkalon en la reagsistemon, rezultigante malprecizajn rezultojn.
Ultrasona fragmentiĝo uzas fizikan disbatadon, kiu estis sukcese uzita fare de GeneXpert, gvida entrepreno en la kampo de POCT por homa uzo, kaj havas absolutan avantaĝon en nukleaacida eltiro de kelkaj kompleksaj specimenoj (kiel ekzemple Mycobacterium tuberculosis).
Tial, oni rekomendas elekti testkompleton aŭ instrumenton agordita kun nukleacida eltira paŝo.kaj ĝi estas optimuma se ekzistas ultrasona eltira modulo.
3. Manlibro, Duonaŭtomata kaj plene aŭtomata?
Ĉi tio estas problemo de laborkosto kaj laborefikeco.Nuntempe, dorlotbesthospitaloj sen sufiĉe da dungitaro, kaj nukleacida eltiro kaj detekto estas laboro kiu postulas certajn kapablojn kaj sperton.Ne estas dubo, ke la plene aŭtomata eltira kaj detekta maŝino de nuklea acido estas la perfekta elekto.
4. Konstanta temperatur-amplificado aŭ ŝanĝiĝema temperatur-amplificado?
La amplifika reago estas nuklea acida detekta ligo, kaj la profesia teknologio implikita en ĉi tiu ligo estas kompleksa.Malglate parolante, enzimoj estas uzataj por plifortigi la nuklean acidon.En la amplifiga procezo, la amplifita fluoreskeca signalo aŭ la enigita fluoreska signalo estas detektita.Ĝenerale, ju pli frue aperas la fluoreska signalo, des pli granda estas la celo-genenhavo de la provaĵo.
Konstanta temperatur-amplifiko estas nuklea acida amplifiko ĉe fiksa temperaturo, dum varia temperatur-amplifiko estas cikla amplifiko strikte laŭ denaturado-kaliĝo-etendo.La konstanta temperatur-amplifikotempo estis efektivigita, dum varia temperatur-amplifikotempo estas multe tuŝita de la rapideco de temperaturaltiĝo kaj falo de la instrumento (nuntempe, multaj produktantoj povis fari 40 ciklojn de amplifiko en proksimume 30 minutoj).
Se la laboratoriokondiĉoj estas bonaj kaj la zonigo estas strikta, estas racie diri ke la precizeca diferenco inter la du ne estos granda.Tamen, varia temperatur-amplifiko sintezos pli da nukleacidaj produktoj en relative pli mallonga tempo.Por laboratorioj sen strikta zonigo kaj profesia trejna personaro, la risko de nuklea acida aerosol elfluo estos pli granda, la falsa pozitivo okazas post elfluo okazas, kaj kiu estas ekstreme malfacile forigi.
Krome, Konstanta temperatur-amplifiko ankaŭ estas pli ema al ne-specifa amplifiko kiam la provaĵo estas kompleksa (la relativa reagtemperaturo estas pli malalta, kaj ju pli alta la etendaĵotemperaturo, des pli bona la komenca ligado-specifo).
Koncerne la nunan teknologion, varia temperatur-amplifiko estas pli fidinda.
5. Kiel eviti la riskon de elfluo de nukleaj acidaj pligrandigaj produktoj?
Nuntempe, multaj fabrikistoj elektas la glando-tipan PCR-tubon kiel la nuklean acidan reaktubon, kiu estas sigelita per frotado, kaj la temperaturmalnaturado en la varia temperaturo-denaturado en la varia temperaturo-PCR-amplifiko atingas 90-gradojn.
Centgrado .La ripeta procezo de ekspansio kun varmo kaj kuntiriĝo kun malvarmo estas granda defio al la sigelo de la PCR-tubo, kaj la glando-tipo PCR-tubo estas relative facile kaŭzi elfluon.
Estas preferinde adopti la reagon per komplete sigelita ilaro/tubo por eviti la elfluon de la reagprodukto.Estus perfekta se ekzistus ellabori plene sigelitan ilaron por eltiro kaj detekto de nukleaj acidoj.
Do la nova plene aŭtomata eltira kaj detekta maŝino de nuklea acido de New Tech havas ĉi-suprajn kvin optimumajn elektojn.
Afiŝtempo: Aŭg-09-2023